سیستم های‌ تکرارهای پالیندرومیک کوتاه خوشه‌ای با فاصله منظم (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats )  فعال CRISPR/Cas12a))، دارای فعالیت‌های برش sic (هدفمند) و برش trans (جانبی) هستند که برای مهندسی ژنوم و کاربردهای تشخیصی مفید می‌باشند. DNA تک‌رشته‌ یا دورشته‌ای می‌تواند crRNA–Cas12a ribonucleoprotein (RNP) را فعال کند تا فعالیت‌های آنزیمی برش cis و trans را به‌دست آورد. با این حال، مشخص نیست که آیا RNA می‌تواند سیستم CRISPR/Cas12a را فعال کند و چه چیزی برای فعالیت برش trans حیاتی است.

این مقاله گزارش می دهد که RNA می‌تواند سیستم CRISPR/Cas12a را فعال کند و فعالیت برش trans آن را راه‌اندازی کند. همچنین نشان ‌می دهد که RNP crRNA–Cas12a فعال‌شده، برش trans توالی‌های بلندتر را-از آنچه معمولاً استفاده می‌شود- ترجیح می‌دهد.

این یافته‌های جدید درباره توانایی برشtrans Cas12a فعال‌شده با RNA ، پایه‌ای برای طراحی و ساخت نانوربات‌های CRISPR که در سلول‌های زنده عمل می‌کنند، فراهم می کند.

در این مطالعه بسترهای RNP crRNA–Cas12a و اسیدنوکلئیک، روی نانوذرات طلا گردآوری شدند تا نانوربات‌های CRISPR را ایجاد کنند که به‌طور چشمگیری غلظت مؤثر موضعی سوبسترا را درمقایسه با RNP وکنیتیک برش trans، افزایش داد. اتصال میکروRNA (miRNA) هدف به RNP crRNA–Cas12a، نانوربات‌ها وعملکرد برش trans آن‌ها را فعال می کند. برش trans مکرر (چند باره) ازسوبسترا‌های برچسب‌گذاری شده با فلوروفور، سیگنال‌های فلورسانس تقویت شده‌ای تولید می کند.

تصویربرداری حساس و درلحظه از میکروRNA خاص در سلول‌های زنده، پتانسیل امیدوارکننده سیستم نانو ربات CRISPR را برای کاربردهای آینده در پایش و تنظیم عملکردهای بیولوژیکی درون سلول‌های زنده، نشان می دهد.

لینک خبر